Generación mediada por CRISPR/Cas9 de minipigs Guangxi
Bama que albergan tres mutaciones en α-sinucleína que causan la enfermedad de
Parkinson
TIPO DE EDICIÓN: in vivo -
células somáticas
DIRIGIDOS HACIA: ADN
genómico, ARN total resultante de la codificación del ARNm, gen SCNA
DIRIGIDOS POR: CRISPR/Cas9 enzimas
de restricción de BmgBI, sgRNA empleado en el vector pMD18-T (3k
bp), utilizando un ligasa de ADN T4 para el exón 3 de SCNA (E46K,
H50Q y G51D).
USO DE VECTORES: pMD18-T
ÓRGANO/CÉLULA A TRATAR: fibroblastos de minipig guangxi bama recién nacidos por co-transfectado en fibroblastos a través de la transfección Xfect.
Clonación de embriones por SCNT
VÍA DE ADMINISTRACIÓN: por inyección
intraperitoneal
RESULTADOS:
Resultados a Corto Plazo: Generamos con éxito un total de ocho minipigs Guangxi Bama derivadas del SCNT con las mutaciones de HETEROCIGOUS SCNA deseadas integradas en el genoma
Resultados a Mediano Plazo: Confirmamos por secuenciación de ADN que estas minipigs expresaban α-sinucleina mutante a nivel de transcripción.
Resultados a Largo Plazo: El análisis inmunohistoquímico no fue capaz de detectar cambios patológicos específicos de la PD, como la patología α-sinucleina-inmunopositiva y la pérdida de neuronas dopaminérgicas de SN en las minipigs editadas por genes a los 3 meses de edad.
Bibliografía
